Page 133 - Kurumsal Veri Yönetimi ve Analitiği Koordinatörlüğü Hassas Görev Analizi

1. Aşamada tavuk tüyleri lif üretimine hazırlanmıştır. Bunun için tüyler yıkanarak temizlenmiş,

dezenfekte edilmiş ve kurutulmuştur.
2. Aşamada ise kurutulmuş tüylerin lif ve sap kısımları özel makine ile ayrıştırılmıştır.

…
Tavuk tüyü liflerinin amino asit içeriğini bilmek tüy liflerinin sonraki kullanımına bağlı üzerinde

yapılmalı olan fiziksel ve kimyasal işlemlerle ilgili karar almak açısından önemlidir. Literatürde bu konuda
yeterli miktarda araştırma yapılmadığı görülmektedir. Sadece Saravanan ve arkadaşları tarafından

yayınlanan bir makale vardır ki, her kes bu makaleye atıfta bulunmaktadır.

Tavuk tüyleri yukarıda belirtilmiş yöntem üzere lif üretimine hazırlık amacıyla yıkanmış, dezenfekte
edilmiş ve kurutulmuştur. Kurutulmuş tüylerden tüy lifi üretilmiş, bu liflerden bir tutam alınarak amino asit

analizine gönderilmiştir. Tavuk tüyü lifi örneklerinin amino asit içeriğinin analizi SÜBİTAM’da, Sıvı
Kromatografisi- Kütle/Kütle Spektrometresi (LC-MS/MS) cihazı kullanılarak iki tekrarlı olarak yapılmış

ve bu amaçla Jasem amino asit kitleri kullanılmıştır.
Başlangıçta numuneler asidik hidrolize uğratılmıştır. Bu amaçla 0,5 g numune kapaklı cam bir tüpe

alınmış ve üzerine kitte bulunan 4ml Reaktif-2 eklenerek 110°C’de 24 saat boyunca hidroliz reaksiyonu

gerçekleştirilmiştir. Hidrolizat oda sıcaklığına ulaştığında 4000 rpm’de 5 dakika süresince
santrifüjlenmiştir. Daha sonra 100 μl süpernatant alınmış ve bir viale aktarılarak damıtık suyla 1ml’ye

tamamlanmıştır. Bu seyreltme prosedürü bir kez daha tekrarlanarak, numunenin 800 kat seyreltilmiş

hidrolizatı elde edilmiştir.
Hidroliz prosesini takiben kit numune hazırlığı şu şekilde uygulanmıştır: 50 μl seyreltilmiş numune

hidrolizatı bir viale transfer edilmiş ve üzerine sırasıyla, 50 μl kararlı izotop etiketli iç standart karışımı ile
700 μl Reaktif-1 ilave edilmiştir.

Daha sonra karışım 5 saniye boyunca vortekslenmiştir. Tüm numuneler yukarıda belirtilmiş
prosedürler doğrultusunda hazırlanarak LC-MS/MS sistemine enjekte edilmiştir. Amino asit miktarlarının

belirlenmesi için gerekli olan kalibrasyon eğrisi, beş nokta kalibrasyon setinin hidroliz prosesi olmaksızın

kit numune hazırlığı gereğince hazırlanmış ve LC-MS/MS sisteminde okutularak elde edilmiştir.
0
Agilent 1260 Infinity HPLC sistemi (Agilent Technologies, Santa Clara, USA) kullanılarak, 30 C’ye
ayarlanmış Jasem amino asit analitik kolonuna, hazırlanmış numuneden 3 μl enjekte edilmiştir.
Kromatografik ayrım, 0,7 mL/dk akışla gradient programlı A ve B mobil fazları ile 7,5 dakikalık analiz

süresinde tamamlanmıştır. Kütle spektrometrik dedeksiyon ise pozitif iyonlaşma modunda ESI donanımlı
Agilent 6460 tandem kütle spektrometresi (Agilent Technologies) cihazıyla gerçekleştirilmiştir. Kütle

0
detektörü parametreleri şu şekilde ayarlanmıştır: gaz sıcaklığı 150 C, gaz akışı 10L/dk, nebulizer basıncı
40 psi ve +2000 volt kapiler voltaj.
…

68